这个帖子发布于 16 年零 267 天前,其间的信息或许已产生改动或有所发展。
生物样品的精细结构易遭损坏,因而在进行制样处理和进行电镜调查前必需做固定,以使其能最大极限地坚持其日子时的形状。而选用水溶性、低外表张力的有机溶液如乙醇等对样品进行梯度脱水,也仍是为了在对样品进行枯燥处理时最好能够下降由外表张力引起的其天然形状的改变。
将处理好的、洁净的盖玻片,切割成4~6mm2的小块,将待检的较浓的大肠杆菌悬浮液滴加其上,或将菌苔直接涂上,也可用盖玻片小块张贴菌落外表,天然枯燥后置光学显微镜镜检,以菌体较密,但又不堆在一起为宜;符号盖玻片小块有样品的一面;将上述样品置于1%~2%戊二醛磷酸缓冲液(pH7.2左右)中,于40C冰箱中固定过夜。次日以0.15%的同一缓冲液冲刷,用40%、70%、90%和100%的乙醇别离顺次脱水,每次15min。脱水后,用醋酸戊脂置换乙醇。
另一种与之类似的样品制备办法是选用离心洗刷的手法将菌体顺次固定及脱水,最终涂布到玻片上。其长处是:①在固定及脱水过程中可彻底避免菌体与空气触摸,然后可最大极限地削减因天然枯燥而引起的菌体变形;②可保证最终制成的样品中有满足的菌体浓度,因为涂在玻片上的菌体在固定及枯燥过程中有时会从玻片上掉落;③保证玻片上有样品的一面不会弄错。
将上述制备的样品置于临界点枯燥器中,浸泡于液态二氧化碳中,加热到临界点温度(31.40,72.8个大气压)以上,使之气化进行枯燥。
样品经脱水后,有机溶剂排挤了水分,侵占了本来水的方位。水是脱掉了,但样品仍是滋润在溶剂中,还必需在外表张力尽或许小的情况下将这些溶剂“请”出去,使样品真实得到枯燥。现在选用最多、作用最好的办法是临界点枯燥法。其原理是在一装有溶液的密闭容器中,跟着温度的升高,蒸腾速率加速,气相密度添加,液相密度下降。当温度添加到某必定值时,气、液二相密度持平,界面消失,外表张力也就不存在了。此刻的温度及压力即称为临界点。将生物样品用临界点较低的物质置换出内部的脱水剂进行枯燥,能够彻底消除外表张力对样品结构的损坏。现在用得最多的置换剂是二氧化碳。因为二氧化碳与乙醇的互溶性欠好,因而样品经乙醇分级脱水后还需用与这两种物质都能互溶的“前言液”醋酸戊脂置换乙醇。
将样品放在真空镀膜机内,把金喷镀到样品外表后,取出样品在扫描电镜中进行调查。